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| [ 文章来源： | 文章作者：
| 发布时间：2006-11-01|
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干扰素(IFN)根据其产生细胞不同和理化性质、犐z物学特性的差异可分为α干扰素(IFN-α)、β干扰素(IFN-β)和γ-干扰素(IFN-γ)。它们在机体免疫调节、抗病毒感染中具有重要作用。检测IFN的方法主要分为定量测定(常用ELISA)和生物学活性的检测，后者较为常用。
(一)原理
干扰素能刺激某些指示细胞(如人羊膜上皮细胞Wish株、人喉癌细胞株Hep-2以及人胚肌皮或肺单层细胞)产生抗病毒蛋白，从而使细胞免受水疱性口炎病毒(VSV)的攻击，根据待测样品不同稀释度的保护能力，计算出干扰素生物学活性单位。
(二) 操作步骤
96孔培养板中加入不同稀释度的IFN和标准IFN，
每个稀释度设3孔，每孔50μl，病毒对照不加IFN
↓
每孔加入100μl 1.5～2×10５／ ml Wish
或Hep-2细胞悬液，37℃、CO?孵箱培养6～12h，
使细胞贴壁为单层
↓
每孔加入50μl含100个 TCID50 VSV,
细胞对照不加病毒液
↓
根据细胞病变状态，终止培养前3～4h
加入5mg／ml MTT, 15μL／孔
↓
加入适量生理盐水，用滴管轻轻吹吸
弃去悬浮病变细胞和死细胞
↓
200μl／孔 二甲亚砜(DMSO)，作用10min
↓
测OD(570nm),表示活细胞中含甲 的量，
也可用刚果红摄入法、结晶紫染色法
测定IFN对活细胞的保护水平
计算:
以保护半数(50％)细胞免受病毒损害的最高干扰素稀释度为1个干扰素活性单位。也可从标准曲线中求得待测样品的IFN活性单位。
(三) 试剂和器材
1. VSV
2. WISH、HeP-2细胞株或人胚肌皮或肺单层培养物。
3. MTT[3-(4,5二甲噻唑-2-yl)-2,5-2苯基-四唑溴盐]，二甲亚砜(DMSO)，刚果红，结晶紫等。
4. 10％FCS RPMI1640, 培养板、培养瓶、CO?孵箱、超净台、酶联检测仪。
(四) 注意事项
1. 实验时先加IFN，后加指示细胞，以使细胞均匀分布于培养板底部。
2. 本法对天然培养上清或重组IFN-α、IFN-β和IFN-γ均可检测其活性单位。
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白细胞介素6(IL-6)生物学